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詳細(xì)信息
【名稱(chēng)】
通用名：牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)?
商品名：無(wú)
英文名稱(chēng)：Lumpy skin disease virus Real-time PCR test (Probe)
【用 途】
適用于動(dòng)物皮膚損傷病灶、皮膚結(jié)痂、唾液、眼鼻等分泌物、奶、精液、糞便、媒介生物等樣品中牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒的特異性檢測(cè)。
【主要成分與含量】
| 序號(hào) | 產(chǎn)品組分 | 規(guī)格 |
| 1 | LSDVPCR反應(yīng)液（含探針） （棕色管） | 1管（1.2mL） |
| 2 | LSDV陽(yáng)性對(duì)照 （紅蓋管） | 1管（100μL） |
| 3 | LSDV陽(yáng)性對(duì)照 （綠蓋管） | 1管（100μL） |
| 4 | 使用說(shuō)明書(shū) | 1份 |
注意：不同批號(hào)的組分不互換使用，試劑盒中組分使用前需充分混勻并離心（建議采用輕彈或顛倒的方式混勻，不建議采用渦旋振蕩器混勻），應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融！
【熒光PCR儀器適用范圍】
ABI7500Fast、ABI7500、Q5等系列，Roche系列，BIO-RAD系列等熒光定量PCR檢測(cè)儀等。
1樣本前處理
①牛病料：剪取50~100mg牛病料組織，加入含500μLPBS或生理鹽水的研缽中緩慢研成勻漿，或采取組織冷凍研磨儀進(jìn)行研磨，將研磨后的勻漿液轉(zhuǎn)移到無(wú)RNA酶污染的滅菌離心管中，6000rpm離心30s；取上清液備用。
②唾液、結(jié)節(jié)潰爛時(shí)產(chǎn)生的分泌物、奶和精液：直接取樣本6000rpm離心1min；取上清液備用。
2樣品DNA提取（樣本處理區(qū)）
取上述前處理后的樣本，按常規(guī)方法提取病毒DNA，也可采用商品化試劑盒提取病毒DNA。陰性對(duì)照參與提取，以對(duì)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。陽(yáng)性對(duì)照無(wú)需提取，直接使用。
3 PCR體系配制
3.1 取出試劑盒，從中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑，融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著的液體；
3.2 根據(jù)不同PCR儀選擇反應(yīng)管或反應(yīng)板，反應(yīng)總體積為25μL，反應(yīng)液在配液區(qū)配制，加樣在樣品處理區(qū)，測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
| 組分反應(yīng)管 | 檢測(cè)管 | 對(duì)照管 | |
| 陽(yáng)性對(duì)照 | 陰性對(duì)照 | ||
| LSDVPCR反應(yīng)液（含探針） | 20μL | 20μL | 20μL |
| LSDV陽(yáng)性對(duì)照 | - | 5μL | - |
| LSDV陰性對(duì)照 | - | - | 5μL |
| 樣品DNA | 5μL | - | - |
| 總體積 | 25μL | 25μL | 25μL |
4 擴(kuò)增（檢測(cè)區(qū)）
按下列參數(shù)設(shè)置反應(yīng)條件：
| 反應(yīng)參數(shù) | 預(yù)變溫度 | 45個(gè)循環(huán) | |
| 變性 | 退火/延伸 | ||
| 溫度 | 95℃ | 95℃ | 58℃ |
| 時(shí)間 | 3min | 10sec | 34sec |
熒光信號(hào)采集設(shè)定在退火/延伸時(shí)。對(duì)于多通道熒光PCR儀，選擇熒光素FAM為信號(hào)采集通道，淬滅基因選None，染料校正選None。
5 結(jié)果判斷
5.1 實(shí)驗(yàn)成立條件
5.1.1 陰性對(duì)照：無(wú)特異性擴(kuò)增曲線(xiàn)或Ct值＞45.0，或無(wú)Ct值。
5.1.2 陽(yáng)性對(duì)照： Ct值應(yīng)＜28.0，且出現(xiàn)明顯的S型擴(kuò)增曲線(xiàn)。
5.2 結(jié)果判定
5.2.1 陽(yáng)性：樣品檢測(cè)結(jié)果Ct值≤40.0，而且出現(xiàn)明顯的S型擴(kuò)增曲線(xiàn)，表明樣品中檢出牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒核酸。
5.2.2 陰性：樣品檢測(cè)結(jié)果Ct值＞45.0或無(wú)特異性S型擴(kuò)增曲線(xiàn)，表明樣品未檢出牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒核酸。
5.2.3 可疑：樣品檢測(cè)結(jié)果Ct值在：40.0~45.0范圍，應(yīng)對(duì)樣本進(jìn)行復(fù)檢。如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在40.0~45.0范圍，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，則判定為陽(yáng)性，否則為陰性。
【注意事項(xiàng)】
1 實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本試劑盒說(shuō)明書(shū)，嚴(yán)格按操作步驟執(zhí)行。
2 所有試劑應(yīng)在規(guī)定的溫度儲(chǔ)存，詳細(xì)信息見(jiàn)試劑標(biāo)簽。
3 為了避免交叉污染，請(qǐng)盡可能在無(wú)核酸酶的環(huán)境下操作，并將試驗(yàn)過(guò)程分區(qū)進(jìn)行（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)等）。
4 配制PCR反應(yīng)體系時(shí)應(yīng)盡量避免氣泡產(chǎn)生，擴(kuò)增前應(yīng)檢查反應(yīng)管是否蓋緊，以免反應(yīng)液泄露污染儀器。
5 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，樣品盡量保證新鮮采集，2~8℃運(yùn)輸，長(zhǎng)途運(yùn)輸請(qǐng)使用干冰。
6 所有試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
試劑盒于-20℃保存，有效期為12個(gè)月。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
試劑盒采用的引物及探針與正在送審的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)采用的引物及探針一致。試劑盒檢測(cè)臨床樣本的最低敏感性為2拷貝/μL。
【規(guī)格】 50頭份/盒
【生產(chǎn)企業(yè)】 重慶澳龍生物制品有限公司
【地 址】 重慶市榮昌區(qū)板橋工業(yè)園區(qū)四支路五號(hào)
【郵 編】 402460
【技術(shù)服務(wù)】 023-46763511
【銷(xiāo)售熱線(xiàn)】 023-46761801
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